Knock-in Tag
在基因功能研究和细胞治疗开发中，内源标签敲入是解析蛋白定位、表达调控及功能动态的关键手段。相比随机整合或质粒转染，Knock-in Tag能够在天然基因调控背景下实现稳定表达与定量分析。
基于自主开发的 FLASH-KI™ 技术平台，我们实现 CRISPR/Cas9 RNP + Donor 模板高效同步递送，支持多类型标签精准敲入，构建高一致性细胞模型。
服务详情
| 细胞类型 | 各种细胞类型，包括肿瘤细胞系、正常体细胞系、干细胞等。 |
|---|---|
| 服务类型 | 荧光标签（Fluorescent Tag）、表位标签（Epitope Tag）、报告基因标签（Reporter Tag）、功能标签（Functional Tag）等Tag敲入 |
| 交付标准 | 单克隆细胞1株、亲本细胞株（2管/株，1×10^6细胞/管） |
| 周期/价格 |
 在线咨询 |
为什么选择我们的Knock-in Tag服务？
核心性能指标
| 指标 | 数值 |
|---|---|
| Knock-in效率 | 45% – 88% |
| 细胞活率 | ≥90% |
| 项目成功率 | 83% |
| 已完成项目 | 100+ |
服务优势
原位精准敲入
在起始密码子、终止密码子或指定外显子定点插入标签，保留天然调控元件
低损伤高适配
细胞活率≥90%
适用于：肿瘤细胞,干细胞（iPSC）,免疫细胞
适用于：肿瘤细胞,干细胞（iPSC）,免疫细胞
高效同步递送（FLASH-KI™)
Cas9RNP+Donor同步递送
无需电转/脂质体
共递送效率显著提升
无需电转/脂质体
共递送效率显著提升
HDR增强体系
搭配KIEnhanceDrug：
转染后约7天达到KI效率峰值
HDR效率显著提升
转染后约7天达到KI效率峰值
HDR效率显著提升
Tag类型及应用:
荧光标签（Fluorescent Tag）
| 标签 | PEGFP、mCherry、mNeonGreen、TagRFP |
|---|---|
| 敲入位置 | N端 / C端 / 内部loop |
| 应用场景 | 活细胞成像蛋白、共定位分析 、FACS分选 |
| 特点 | 内源表达，荧光强度与表达量一致 |
表位标签（Epitope Tag）
| 标签 | FLAG、HA、Myc、V5、His |
|---|---|
| 敲入位置 | N端 / C端 |
| 应用场景 | 免疫沉淀（Co-IP）、Western Blot 检测、染色质免疫沉淀（ChIP）、蛋白纯化、蛋白质相互作用研究(Protein Interaction Studies) |
| 特点 | 无需特异抗体，检测一致性高 |
报告基因标签（Reporter Tag）
| 标签 | Luciferase（Firefly/Renilla）、HiBiT |
|---|---|
| 敲入位置 | 3'UTR 或 ORF |
| 应用场景 | 信号通路分析、高通量筛选、体内成像、启动子活性检测（Promoter Activity Assay）、基因表达追踪（Gene Expression Tracking） |
| 特点 | 高灵敏度、可定量、适合自动化平台 |
功能标签（Functional Tag）
| 标签 | Halo-Tag、SNAP-Tag、Degron、Biotin |
|---|---|
| 敲入位置 | N端 / C端（根据功能需求） |
| 应用场景 | 条件性蛋白敲降（degron）、光遗传学标记、邻近标记（BioID/TurboID）、泛素化研究、活细胞功能标记（Live-cell Functional Labeling）、药物靶点验证（Drug Target Validation） |
| 特点 | 支持功能调控，可扩展研究维度 |
多标签组合设计
支持：EGFP + FLAG ，Reporter + Degron等复合敲入，满足复杂应用。
服务流程
成功案例
HEK293T细胞GAPDH基因EGFP-Tag融合敲入
目标：在GAPDH基因C端敲入EGFP标签，用于实时追踪活细胞糖酵解通量。
方案：Flash-KI™递送Cas9 RNP + 含EGFP序列及同源臂的Donor载体，配合 KI Enhance Drug。
结果：多克隆细胞敲入效率88%，成功获得稳定表达细胞。
方案：Flash-KI™递送Cas9 RNP + 含EGFP序列及同源臂的Donor载体，配合 KI Enhance Drug。
结果：多克隆细胞敲入效率88%，成功获得稳定表达细胞。
88% EGFP-KI in HEK293T cell pool by Flash-KI
CHO-K1细胞AAVS1-Luciferase定点敲入
目标：在CHO-K1细胞安全港位点敲入Luciferase报告基因，用于长期体内生物发光示踪。
方案：Flash-KI™ 递送 Cas9 RNP + 含 Luciferase Donor载体。
结果：成功获得单拷贝定点整合克隆，体外发光强度高且稳定，客户用于细胞治疗产品的生物分布研究。
方案：Flash-KI™ 递送 Cas9 RNP + 含 Luciferase Donor载体。
结果：成功获得单拷贝定点整合克隆，体外发光强度高且稳定，客户用于细胞治疗产品的生物分布研究。
| Sample | Replicate 1 | Replicate 2 | Replicate 3 | Mean | Expression Fold |
|---|---|---|---|---|---|
| WT | 750 | 978 | 1402 | 1043 | 226 |
Advantage and Characteristic
Optimazied Strategy
We have create a unique sgRNA Design Logic
Optimazied Strategy
We have create a unique sgRNA Design Logic
Optimazied Strategy
We have create a unique sgRNA Design Logic
Optimazied Strategy
We have create a unique sgRNA Design Logic
FAQ
标签敲入后会影响内源蛋白功能吗？
我们会对切割位点丢失的氨基酸进行回补，同时优先设计在非关键结构域（如柔性接头连接）或 3'UTR 敲入；也可提供“自切割肽”（P2A/T2A）策略实现蛋白同时表达但不相连。
是否支持大片段标签敲入？
支持。Flash 可递送长环状供体，我们成功完成过3.5 kb的Luciferase完整表达盒敲入。
适合哪些细胞类型？
已成功用于CHO-K1、HEK293、HeLa、A549、iPSC、类器官等细胞系。难转染细胞表现尤为突出。
Flash-KI™ 相比 ssODN 或 AAV 递送有何优势？
Flash 递送同时实现 RNP 和长片段供体的高效共递送，无需电转或 AAV 包装；细胞损伤更低，HDR 效率显著优于传统方法。
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